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CNRS UPR 3212
Institut des Neurosciences Cellulaires et Intégratives
Communication et réseaux de neurones
Équipe "Trafic membranaire dans les cellules du système nerveux"

Formation des sites d’exocytose dans les cellules neuroendocrines

 

Chef de projet
Sylvette
CHASSEROT-GOLAZ

Dans les cellules neuroendocrines, le recrutement des granules de sécrétion à la membrane plasmique suivi de l'étape de fusion permettant la libération hormonale se font au niveau de sites spécifiques dédiés à l'exocytose. La nature et la formation de ces sites, et plus généralement les mécanismes de remodelage des membranes biologiques restent peu connus et représentent un défi majeur en biologie cellulaire.

L'Annexine A2 (AnxA2) est une protéine monomérique, ou tétramérique associée à la protéine S100A10, qui lie les phospholipides et l'actine en présence de calcium. Nous avons montré que l'AnxA2 est capable de former des radeaux lipidiques enrichis en lipides de type GM1/PIP2 nécessaires au fonctionnement du complexe SNARE permettant l'arrimage des granules à la membrane plasmique. Le recrutement de l'AnxA2 au voisinage des complexes SNARE et la mise en place des sites d'exocytose se fait en présence de calcium grâce à une interaction entre S100A10 et VAMP2, une protéine SNARE.


Notre objectif actuel est de montrer que les sites d'assemblages de la machinerie de l'exocytose sont constitués de plateformes de nature lipidique. Nous étudions la composition de ces plateformes et leurs mécanismes de formation impliquant l'AnxA2 et le cytosquelette d'actine. L'importance fonctionnelle de ces plateformes lipidiques déterminées par l'AnxA2 est aussi abordée dans le cadre de la neurotransmission (plasticité synaptique dans les neurones, mécanismes de la nociception).

 

illustration

Les microdomaines lipidiques sont formés à l'extrémité de filaments d'actine associés aux granules ancrés à la membrane plasmique. Double marquage de l'actine (billes d'or de10 nm) et du GM1 (billes d'or de 6 nm) sur des feuillets membranaires de cellules chromaffines stimulées.

 

Techniques

 Modèles expérimentaux :

  • Culture primaire de cellules chromaffines (bœuf, souris)
  • Lignées cellulaires neuroendocrines (PC12, BON)
  • Souris "Knock-out"

Biologie Cellulaire :

  • Immunocytochimie
  • Transfection (agents lipidiques, electroporation, virus)
  • Microscopie (epifluorescence, confocale, onde evanescente, electronique à transmission, vidéomicroscopie)
  • Ampèrométrie

Biologie-Moléculaire :

  • ARN interférence
  • Clonage et sous-clonage
  • Mutagenèse dirigée
  • PCR, RT-PCR conventionnelle et en temps réel, Préparation d’ADN
  • Synthèse de protéines recombinantes

Biochimie :

  • Analyse des lipides
  • Electrophorèse sur gel dénaturant
  • Immunoprécipitation
  • Western-Blot
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