PCR quantitative en temps réel

Principe et But

La PCR quantitative (PCR en temps réel, QPCR) utilise le principe de base de la PCR classique (amplification cyclique d’un fragment d’ADN basée sur une réaction enzymologique) avec pour différence une amplification mesurée non pas en final mais tout au long de la réaction, et donc en temps réel.

A chaque cycle d’amplification, la quantité d’ADN est mesurée grâce à un marqueur fluorescent tel que le « syber green » dont l’émission est directement proportionnelle à la quantité d’amplicons produits. Ceci permet d’obtenir une cinétique de la réaction et donc la quantification de l’ADN alors que la PCR classique ne donne que la mesure finale. Ainsi cette technique permet de comparer les différences d’expression des gènes en fonctions des paramètres expérimentaux définis par le chercheur.



Équipement

L’équipe dispose d’un thermocycler MyIQ de marque Biorad pour plaques 96 puits couplé à une lampe UV et à un spectrophotomètre, le tout piloté par ordinateur grâce au logiciel BioRad IQ5.
thermocycler Mylq

Cet équipement se complète d’un robot de pipetage « freedom evo » de marque TECAN qui permet de préparer les plaques PCR de 96 puits en un temps record (environs 7 minutes) tout en évitant les erreurs de pipetages ou de contaminations liées à l’utilisateur. Ce robot de pipetage est particulièrement intéressant si le nombre de plaques à effectuer est important. Ce robot est piloté via le logiciel Evoware de TECAN.



Contact

Le plateau technique de PCR quantitative est situé au 4e étage l’Institut (pièce 4312a). Il a pour mission de mettre à disposition des chercheurs et des personnels de l’INCI la technologie de QPCR.

Support Scientifique : Vincent LELIEVRE, PR2 UdS