Principe et But
La PCR quantitative (PCR en temps réel, QPCR) utilise le principe de base de la PCR classique (amplification cyclique d’un fragment d’ADN basée sur une réaction enzymologique) avec pour différence une amplification mesurée non pas en final mais tout au long de la réaction, et donc en temps réel.
A chaque cycle d’amplification, la quantité d’ADN est mesurée grâce à un marqueur fluorescent tel que le « syber green » dont l’émission est directement proportionnelle à la quantité d’amplicons produits. Ceci permet d’obtenir une cinétique de la réaction et donc la quantification de l’ADN alors que la PCR classique ne donne que la mesure finale. Ainsi cette technique permet de comparer les différences d’expression des gènes en fonctions des paramètres expérimentaux définis par le chercheur.
Équipement
thermocycler Mylq
Cet équipement se complète d’un robot de pipetage « freedom evo » de marque TECAN qui permet de préparer les plaques PCR de 96 puits en un temps record (environs 7 minutes) tout en évitant les erreurs de pipetages ou de contaminations liées à l’utilisateur. Ce robot de pipetage est particulièrement intéressant si le nombre de plaques à effectuer est important. Ce robot est piloté via le logiciel Evoware de TECAN.
Contact
Support Scientifique : Vincent LELIEVRE, PR2 UdS
